ATP检测方法

发布日期：2022-12-27 00:00 来源：http://www.chuqi.net 点击：

ATP检测方法
三磷酸腺苷(Adenosine Tri-Phosphate, ATP)是自然界各种生命活动中共用的能量载体。无论是真核细胞还是原核细胞，都以ATP作为能量储存和转移的分子。ATP可作为细胞活性的一个标志物。具有代谢活性的细胞含有一定量的ATP，检测ATP含量可作为培养细胞增殖和细胞毒性的定量指标；而在细胞发生凋亡或坏死时，其ATP含量会迅速下降。通过监测ATP含量的改变，可以评价多种药物、生物制剂或生物活性物质引起的细胞杀伤、细胞抑制和细胞增殖作用。ATP也常作为微生物污染的一个指标，微生物繁殖引起食品、药品等ATP含量的增高，可以被敏感地检测到。

ATP检测可以用成色反应、荧光、化学发光或同位素等方法实现。采用化学发光方法检测ATP，具有更高的敏感性，并具有简便、快速等特点，因此是目前更为流行的方法。化学发光方法检测ATP，是基于萤火虫荧光素酶催化荧光素氧化，消耗ATP，发出光子的高效发光反应；该反应的发光效率极高，发光量与ATP含量有很好的线性关系。本公司生产的ATP检测试剂盒，应用突变重组的萤火虫荧光素酶，催化长时发光反应，专门测定ATP含量。

生物体内多种酶促反应以ATP为底物，消耗能量；ATP的高能磷酸键断裂，形成ADP或AMP。多种具有重要生物功能的酶如激酶、ATP酶等产生ADP，通过检测其酶促反应中ADP与ATP比值，可以间接监测酶促反应的进程。细胞在发生凋亡或坏死时，其ADP与ATP含量的变化特征不同，检测细胞中ADP与ATP比值，也是区分细胞凋亡或坏死的一个间接指标。本公司生产的ATP/ADP检测试剂盒，在测定ATP含量的基础上，进一步将ADP转化为ATP，采用相同的ATP测定方法，对ADP含量进行定量，从而得到ADP与ATP比值。单个样品一体化的测定方法，给实验工作带来很大的便利。
1. 电泳法：根据核苷酸分子同时携带酸碱基团，在一定条件下，利用其在电场中的迁移速度不同而实现分离。

1) 纸电泳法：将电场加在浸泡过缓冲液的滤纸上，使ATP与其他杂质分离，再利用比色法测定ATP的吸收值，计算其含量。此法是卫生部及地方采用的ATP标准检测方法。

2) 凝胶电泳法：根据介质不同，可分为聚丙烯酰胺电泳法（PAGE），SDS-PAGE和琼脂糖凝胶电泳法，前两种方法常用于生物机制的研究。琼脂糖凝胶电泳法是以琼脂糖为介质，柠檬酸为缓冲液，利用电泳将ATP与杂质分离，实现ATP含量检测。

3) 毛细管电泳法：以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，利用各组分间淌度和分配行为上的差异，实现ATP与杂质的分离。

2. 光学分析法：因其操作简单、仪器要求低，常用于科研领域的ATP含量分析。

1) 分光光度法：采用ATP试剂盒，因ATP腺嘌呤碱基上存在共轭双键，在紫外下有吸收峰，可用紫外分光光度法检测ATP含量。

2) 生物发光法：利用荧光素在荧光素酶的作用下，与ATP发生反应，生成荧光素-ATP复合体，该复合体被分子氧氧化后激发荧光素发光，根据发光强弱可检测ATP含量。

3. 层析法：利用样品各组分之间亲和力、分配系数等化学性质的差异，实现ATP与其它杂质的分离。

1) 纸层析法：是检测核苷酸含量的常用方法之一。该方法常以异丙醇、浓氨水和水按7：1：2的混合作为展开剂。

2) 薄层层析法：该方法纸层析法原理基本相同，也是检测核苷酸含量的常用方法之一，其常用的展开剂是正丁醇、丙酮、冰乙酸、氨水、水按7：5：3：3：2的比例混合而成。

3) 离子交换色谱法：利用样品各组分离子交换能力或选择系数之间的差异，实现分离，常用于工业生产中ATP含量检测。

4) 高效液相色谱法：此方法具有强大的分离能力，操作简单，分析时间短，灵敏度高，结果准确，是目前应用广泛的一种ATP检测方法

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